一种固定化酶酶解猪小肠精品肝素钠的提取方法

肝素是一种广泛存在于哺乳动物组织中的黏多糖，具有抗凝血作用，被广泛用于手术和脑血栓、心肌梗死等的治疗。肝素钠以O-连接形式与核心蛋白形成肝素蛋白聚糖。目前还没有任何一种药物可以替代它，且尚不能人工合成，所以对于肝素钠的提取还是分离方法都有待进一步提高。肝素钠是由猪或牛的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质，外观为白色或灰棕色无定性粉末，无臭，无味，有吸湿性，易溶于水，不溶于乙醇、乙醚、丙酮和苯等有机溶剂。肝素钠是粘多糖硫酸酯类抗凝血药，近年来研究证明肝素钠还有降血脂作用。肝素钠存在于动物的心、肝、脾、肺、胸腺、肌肉、血管等，但主要来源于动物富含肥大细胞的组织，如肝、肺、内肠等，以O-连接形式与核心蛋白形成肝素蛋白聚糖。肝素可以和百余种蛋白相互作用，呈现出降血脂、抗动脉粥样硬化、免疫调节、抗炎、抗肿瘤、抗单纯孢疹病毒、抗凝血等生物活性。肝素于1920年就开始其大规模制备研究，并于1935年应用于临床，是目前世界上产量和销售量最大的来自天然的糖类药物，目前还没有任何一种药物可以替代它，且尚不能人工合成。目前，用肝素钠粗品生产低分子肝素钠的工艺有三种，即物理分离法、化学裂解法和合成法。物理分离法主要用于结构测定和生物活性的研究，合成法现在主要用于研究，还不能应用于工业生产。工业生产现用的化学裂解法和酶化学裂解法主要有过氧化物降解法，肝素酶降解法和B消除降解法等。但这些方法的生产周期长，产品得率低只有75~80％，纯度较低，工艺复杂，性质不稳定，生产成本高。

华炬科技新产品研究所技术咨询委员会科研人员现推荐一项一种固定化酶酶解猪小肠精品肝素钠的提取方法，该技术主要解决的技术问题：针对目前精品肝素钠提取存在着生产周期大，产品得率和纯率较低，提取的肝素钠工艺复杂生产成本高等问题，提供了一种固定化酶酶解猪小肠精品肝素钠的提取方法。该技术用纳米二氧化硅负载胰蛋白酶，制得固定化胰蛋白酶酶解猪小肠黏膜液，再将酶解液经树脂吸附，再用氯化钠溶液洗脱解吸附，收集吸附液用超滤膜过滤分离，经乙醇沉淀、干燥一步纯化制得精品肝素钠。该技术利用固定化酶酶解猪小肠，且固定化胰蛋白酶方便回收，因无需高温灭酶，不会转变为杂质影响纯化工艺，又利用D﹣254型树脂可以吸附粗品肝素钠中杂质，提高了除杂率，解决了传统肝素钠提取率低、得率低和性质不稳定等问题，该技术提取的肝素钠纯度较高，性质稳定，操作过程简单，生产成本较低，适合大规模生产，该技术的有益效果是：（1）该技术制得的肝素钠精品纯率提高60~70%，得率提高了50~60%；（2）肝素钠提取过程中，性质稳定，不发生成分改变；（3）操作过程简单，生产周期短，成本低，适合大规模生产和使用。现将该一种固定化酶酶解猪小肠精品肝素钠的提取方法及技术方案及实施例介绍如下供研究交流参考：（311211  355563）